摘要:
目的 探討褪黑素對帕金森病大鼠轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)、血紅素加氧酶1(HO-1)的調(diào)控作用及其對小膠質(zhì)細胞活化的影響。方法 取SD大鼠72只,按照隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、褪黑素(5 mg/kg)組、Nrf2抑制劑全反式維甲酸(ATRA,7 mg/kg)組、Nrf2抑制劑陰性對照(Nrf2-NC)(植物油,10 mL/kg)組、褪黑素+ATRA(5 mg/kg+7 mg/kg)組,每組12只。除對照組外,其余各組大鼠通過腦黑質(zhì)區(qū)內(nèi)注射6-羥多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病模型。造模成功后各組開始給藥,模型組和對照組ip等量生理鹽水,各組連續(xù)給藥8周,2次/d。末次給藥后對大鼠進行行為學(xué)評分;免疫組化法檢測黑質(zhì)部多巴胺能神經(jīng)元及小膠質(zhì)細胞活化陽性染色細胞數(shù)目;免疫熒光共定位檢測Nrf2、活化小膠質(zhì)細胞(IBA1標記)重合表達的細胞數(shù)目;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測黑質(zhì)部代謝產(chǎn)物α-突觸核蛋白(α-Syn)和β淀粉樣蛋白(Aβ)。采用Western blotting檢測黑質(zhì)部Nrf2、HO-1、腫瘤壞死因子(TNF-α)、環(huán)氧化酶2(COX-2)、小膠質(zhì)細胞活化特異性標記物(OX-42)蛋白相對表達水平。結(jié)果 與對照組比較,模型組大鼠出現(xiàn)單側(cè)或雙側(cè)后肢部分癱瘓及行走、進食困難現(xiàn)象,行為學(xué)評分顯著升高(P<0.05)。與模型組相比,褪黑素組大鼠出現(xiàn)行走時轉(zhuǎn)圈,很少有癱瘓及行走困難癥狀,且行為評分降低(P<0.05)。ATRA組大鼠單側(cè)或雙側(cè)后肢部分癱瘓大鼠例數(shù)增多,行為學(xué)評分最高(P<0.05)。與對照組相比,模型組大鼠黑質(zhì)區(qū)Nrf2與IBA1重合表達細胞數(shù)目、小膠質(zhì)細胞活化數(shù)目、α-Syn和Aβ水平及HO-1、OX-42、TNF-α、COX-2水平和細胞核中Nrf2表達水平升高(P<0.05),多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目減少。與模型組相比,褪黑素組大鼠黑質(zhì)Nrf2與IBA1重合表達細胞數(shù)目、多巴胺能神經(jīng)元陽性染色數(shù)目、HO-1及細胞核中Nrf2表達升高(P<0.05),小膠質(zhì)細胞活化數(shù)目、α-Syn及Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表達降低(P<0.05);ATRA組黑質(zhì)區(qū)Nrf2與IBA1重合表達細胞數(shù)目、多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目、HO-1水平及細胞核中Nrf2水平降低(P<0.05),小膠質(zhì)細胞活化數(shù)目、α-Syn和Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表達水平進一步升高(P<0.05)。褪黑素+ATRA組大鼠上述指標變化與褪黑素組相反(P<0.05)。褪黑素+ATRA組及Nrf2-NC組上述指標與模型組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 褪黑素可能通過激活Nrf2/HO-1通路,抑制炎癥反應(yīng)及小膠質(zhì)細胞活化,減少帕金森病大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元丟失。