摘要:
目的 探討褪黑素對帕金森病大鼠轉錄因子NF-E2相關因子2(Nrf2)、血紅素加氧酶1(HO-1)的調控作用及其對小膠質細胞活化的影響。方法 取SD大鼠72只,按照隨機數字表法分為對照組、模型組、褪黑素(5 mg/kg)組、Nrf2抑制劑全反式維甲酸(ATRA,7 mg/kg)組、Nrf2抑制劑陰性對照(Nrf2-NC)(植物油,10 mL/kg)組、褪黑素+ATRA(5 mg/kg+7 mg/kg)組,每組12只。除對照組外,其余各組大鼠通過腦黑質區(qū)內注射6-羥多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病模型。造模成功后各組開始給藥,模型組和對照組ip等量生理鹽水,各組連續(xù)給藥8周,2次/d。末次給藥后對大鼠進行行為學評分;免疫組化法檢測黑質部多巴胺能神經元及小膠質細胞活化陽性染色細胞數目;免疫熒光共定位檢測Nrf2、活化小膠質細胞(IBA1標記)重合表達的細胞數目;酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測黑質部代謝產物α-突觸核蛋白(α-Syn)和β淀粉樣蛋白(Aβ)。采用Western blotting檢測黑質部Nrf2、HO-1、腫瘤壞死因子(TNF-α)、環(huán)氧化酶2(COX-2)、小膠質細胞活化特異性標記物(OX-42)蛋白相對表達水平。結果 與對照組比較,模型組大鼠出現單側或雙側后肢部分癱瘓及行走、進食困難現象,行為學評分顯著升高(P<0.05)。與模型組相比,褪黑素組大鼠出現行走時轉圈,很少有癱瘓及行走困難癥狀,且行為評分降低(P<0.05)。ATRA組大鼠單側或雙側后肢部分癱瘓大鼠例數增多,行為學評分最高(P<0.05)。與對照組相比,模型組大鼠黑質區(qū)Nrf2與IBA1重合表達細胞數目、小膠質細胞活化數目、α-Syn和Aβ水平及HO-1、OX-42、TNF-α、COX-2水平和細胞核中Nrf2表達水平升高(P<0.05),多巴胺能神經元數目減少。與模型組相比,褪黑素組大鼠黑質Nrf2與IBA1重合表達細胞數目、多巴胺能神經元陽性染色數目、HO-1及細胞核中Nrf2表達升高(P<0.05),小膠質細胞活化數目、α-Syn及Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表達降低(P<0.05);ATRA組黑質區(qū)Nrf2與IBA1重合表達細胞數目、多巴胺能神經元數目、HO-1水平及細胞核中Nrf2水平降低(P<0.05),小膠質細胞活化數目、α-Syn和Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表達水平進一步升高(P<0.05)。褪黑素+ATRA組大鼠上述指標變化與褪黑素組相反(P<0.05)。褪黑素+ATRA組及Nrf2-NC組上述指標與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義。結論 褪黑素可能通過激活Nrf2/HO-1通路,抑制炎癥反應及小膠質細胞活化,減少帕金森病大鼠黑質多巴胺能神經元丟失。