摘要:
目的 探討二甲雙胍對高糖誘導的腎小管上皮HK-2細胞上皮間質轉化(EMT)的影響及其機制。方法 以0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0 mmol/L二甲雙胍作用48 h后,采用噻唑藍(MTT)法檢測HK-2細胞活力以篩選合適的二甲雙胍作用濃度;將體外培養(yǎng)的HK-2細胞分為對照組(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高滲組(24.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖組(30 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+7.5 mmol/L二甲雙胍組(30 mmol/L D-葡萄糖+7.5 mmol/L二甲雙胍)和高糖+15 mmol/L二甲雙胍組(30 mmol/L D-葡萄糖+15 mmol/L二甲雙胍),倒置顯微鏡觀察各組HK-2細胞形態(tài),免疫印跡法(Western blotting)檢測各組HK-2細胞中α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)、轉化生長因子-β(TGF-β)、細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)蛋白表達水平,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測α-SMA、E-cadherin、TGF-β、ERK、MMP-9 mRNA表達水平。結果 與對照組相比,30.0、60.0 mmol/L二甲雙胍作用后HK-2細胞活力明顯升高,120.0 mmol/L二甲雙胍作用后HK-2細胞活力明顯降低(P<0.05),而7.5、15.0 mmol/L二甲雙胍作用后HK-2細胞活力差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與對照組比較,高滲組細胞形態(tài)無明顯改變,且細胞中α-SMA、E-cadherin、TGF-β、MMP-9蛋白和mRNA表達水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表達水平差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但高糖組細胞失去原有形態(tài)變?yōu)殚L梭形,且細胞中α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表達水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表達水平明顯升高,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表達水平明顯降低(P<0.05);與高糖組比較,高糖+7.5 mmol/L二甲雙胍組、高糖+15.0 mmol/L二甲雙胍組細胞形態(tài)由長梭形逐漸變成圓形或橢圓形,且α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表達水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表達水平明顯降低,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表達水平明顯升高(P<0.05),且高糖+15.0 mmol/L二甲雙胍組細胞上述指標變化幅度大于高糖+7.5 mmol/L二甲雙胍組。結論 二甲雙胍可抑制高糖誘導的腎小管上皮HK-2細胞EMT,其作用機制可能與抑制TGF-β/ERK/MMP-9通路活化有關。