摘要:
目的 研究丹參酮ⅡA對(duì)人喉癌細(xì)胞順鉑耐藥的影響作用及機(jī)制。方法 以不同質(zhì)量濃度(0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L)順鉑干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人喉癌Hep-2細(xì)胞和人喉癌順鉑耐藥細(xì)胞(Hep-2/DDP)48 h,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)和耐藥指數(shù)(RI)。以不同質(zhì)量濃度(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L)丹參酮ⅡA干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hep-2細(xì)胞48 h,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,計(jì)算IC50;采用丹參酮ⅡA(IC505.32 mg/L)+不同質(zhì)量濃度(0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L)順鉑干預(yù)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hep-2/DDP細(xì)胞48 h,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,計(jì)算2種藥物聯(lián)用的IC50和逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(RF)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hep-2/DDP細(xì)胞,設(shè)置對(duì)照組、順鉑組、丹參酮ⅡA+順鉑組、丹參酮ⅡA+順鉑+胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)組。各組分別給藥干預(yù)48 h后,采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率和凋亡率,Western blotting法檢測(cè)B細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 順鉑對(duì)Hep-2細(xì)胞的IC50為4.58 mg/L,對(duì)Hep-2/DDP細(xì)胞的IC50為14.09 mg/L,RI為3.08;丹參酮ⅡA對(duì)Hep-2細(xì)胞的IC50為5.32 mg/L;丹參酮ⅡA聯(lián)合順鉑對(duì)Hep-2/DDP細(xì)胞的IC50為3.34 mg/L,RF為4.22。與對(duì)照組比較,順鉑組Hep-2/DDP細(xì)胞增殖抑制率、凋亡率顯著升高(P<0.01);與順鉑組比較,丹參酮ⅡA+順鉑組Hep-2/DDP細(xì)胞增殖抑制率、凋亡率顯著升高(P<0.05);與丹參酮ⅡA+順鉑組比較,丹參酮ⅡA+順鉑+I(xiàn)GF-1組Hep-2/DDP細(xì)胞增殖抑制率、凋亡率顯著降低(P<0.05)。與對(duì)照組相比,順鉑組Hep-2/DDP細(xì)胞Bcl-2表達(dá)量顯著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表達(dá)量和Bax/Bcl-2值顯著升高(P<0.05)。與順鉑組比較,丹參酮ⅡA+順鉑組Hep-2/DDP細(xì)胞Bcl-2表達(dá)量顯著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表達(dá)量和Bax/Bcl-2值顯著升高(P<0.05)。與丹參酮ⅡA+順鉑組比較,丹參酮ⅡA+順鉑+I(xiàn)GF-1組Hep-2/DDP細(xì)胞Bcl-2表達(dá)量顯著升高,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表達(dá)量和Bax/Bcl-2值顯著降低(P<0.05)。與對(duì)照組相比,順鉑組Hep-2/DDP細(xì)胞p-PI3K、p-Akt表達(dá)量及PI3K、Akt磷酸化(p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt)水平顯著降低(P<0.05)。與順鉑組比較,丹參酮ⅡA+順鉑組Hep-2/DDP細(xì)胞p-PI3K、p-Akt表達(dá)量及PI3K、Akt磷酸化水平顯著降低(P<0.05)。與丹參酮ⅡA+順鉑組比較,丹參酮ⅡA+順鉑+I(xiàn)GF-1組Hep-2/DDP細(xì)胞p-PI3K、p-Akt表達(dá)量及PI3K、Akt磷酸化水平顯著升高(P<0.05)。結(jié)論 丹參酮ⅡA可逆轉(zhuǎn)人喉癌細(xì)胞順鉑耐藥,其作用機(jī)制可能與抑制PI3K/Akt通路活化而促進(jìn)喉癌細(xì)胞凋亡有關(guān)。