摘要:
目的 探究鈣激活氯通道參與七氟醚對大鼠腦缺血后神經(jīng)血管單元的保護機制研究。方法 將TMEM16A局部腦內(nèi)基因敲除大鼠分為假手術組、模型組、沉默TMEM-16A(LV-shTMEM16A)組、七氟醚組、七氟醚+LV-shTMEM16A組。除假手術組外,其余各組大鼠建立中動脈腦缺血模型,七氟醚組與七氟醚+LV-shTMEM16A組大鼠中動脈缺血期間,持續(xù)吸入3%七氟醚治療。大鼠腦缺血2h后,拔除線栓,檢測神經(jīng)元中Ca2+與Cl-含量。3 d后評估神經(jīng)功能。將大鼠處死,取大鼠腦組織分別開展TTC染色分析各組大鼠腦梗死區(qū)面積,TUNEL染色觀察大鼠腦組織中TUNEL染色陽性細胞率,CD31免疫組化法檢測新生血管生成標記物CD31,Western blotting檢測凋亡和神經(jīng)營養(yǎng)相關蛋白表達。結(jié)果 與模型組相比,七氟醚組大鼠神經(jīng)元中Ca2+與Cl-濃度降低,神經(jīng)功能評分降低且腦梗死面積明顯減少。七氟醚組大鼠腦組織中CD31水平與VEGF蛋白表達進一步升高,TUNEL染色陽性細胞率減少,凋亡相關蛋白Bcl-2相關X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)表達量降低,神經(jīng)營養(yǎng)相關蛋白轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)與酪氨酸激酶受體B(TrkB)蛋白表達量升高。與七氟醚組相比,七氟醚+LV-shTMEM16A組大鼠神經(jīng)元中雖然Cl-沒有變化,但Ca2+濃度增加,神經(jīng)功能評分升高且腦梗死面積增加,大鼠腦組織中CD31水平與VEGF蛋白表達減少,TUNEL染色陽性細胞率增加,Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表達量增加,而TGF-β、BDNF與TrkB蛋白表達量減少。結(jié)論 七氟醚可能通過抑制TMEM16A蛋白表達,降低Ca2+與Cl-電流,一方面抑制了神經(jīng)元凋亡,另一方面促進了神經(jīng)血管單元的新生,最終達到減輕神經(jīng)功能損傷的作用。