摘要:
目的 通過網(wǎng)絡藥理學、分子對接和體外實驗探討漢防己甲素(TET)治療胰腺癌的潛在作用靶點,并闡明其相關分子機制。方法 利用中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫與分析平臺(TCMSP)、SwissTargetPrediction和PharmMapper數(shù)據(jù)庫構建TET的潛在作用靶點數(shù)據(jù)集,與在GeneCards和OMIM數(shù)據(jù)庫中獲得的PAAD相關靶點取交集,得到TET治療PAAD的潛在作用靶點。利用STRING數(shù)據(jù)庫獲取交集靶點蛋白的蛋白質(zhì)–蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡信息并導入Cytoscape 3.8.0篩選核心靶點;運用Metascape數(shù)據(jù)庫對交集靶點進行基因本體論(GO)功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)信號通路富集分析。使用AutoDock和PyMol軟件進行分子對接驗證。采用CCK-8法檢測不同梯度濃度TET對胰腺癌細胞增殖活性的影響;胰腺癌細胞分為對照組和漢防己甲素6.25、12.5、25 μmol/L組,采用細胞劃痕愈合實驗、克隆形成實驗和流式細胞術檢測各組細胞遷移率、克隆形成情況和細胞周期變化。實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測各組細胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)–蛋白激酶B(Akt)通路相關基因表達水平。結果 獲得TET影響胰腺癌的潛在靶點140個,分析構建胰腺癌與TET之間的PPI網(wǎng)絡,獲得核心靶點Akt1、表皮生長因子受體(EGFR)和PIK3CA等。分子對接顯示這些核心靶點與TET都具有良好的結合活性。GO和KEGG富集分析表明TET治療胰腺癌的關鍵靶點主要涉及磷酸化等生物學過程和PI3K-Akt等信號通路。胰腺癌細胞的死亡率隨著TET濃度的增加而升高。與對照組比較,TET組細胞遷移率降低(P<0.01),TET組PANC-1細胞克隆形成數(shù)減少(P<0.001);與對照組比較,TET組G0/G1期比例升高(P<0.001)。與對照組相比,TET組血小板源性生長因子受體α(PDGFRA)基因表達下調(diào)(P<0.05),而T細胞白血病/淋巴瘤1A(TCL1A)、Jun、ILK、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核轉錄因子-κB抑制劑α(NF-κBIA)、PIK3CA、絲裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)基因表達水平顯著升高(P<0.05)。結論 TET可抑制人胰腺癌細胞增殖、遷移和克隆,造成細胞周期阻滯,其作用機制可能與PI3K-Akt信號通路有關。