2和21% O2環(huán)境下培養(yǎng)hUCMSCs,使用群體倍增時間(PDT)評價hUCMSCs的增殖情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR的表達(dá);培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化后,茜素紅-S對含鈣骨細(xì)胞染色檢測成骨誘導(dǎo)分化,油紅O對脂滴染色檢測成脂誘導(dǎo)分化,阿爾新藍(lán)8GX對蛋白多糖檢測軟骨誘導(dǎo)分化;羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)染色法檢測hUCMSCs對植物血凝素P(PHA-P)刺激的外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的增殖抑制作用,并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測對CD8+T細(xì)胞的抑制作用;實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)、胰島素樣生長因子2(IGF-2)、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、基質(zhì)細(xì)胞衍生生長因子1(SDF-1)、神經(jīng)生長因子(NGF)mRNA表達(dá);試劑盒法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IGF-2濃度。結(jié)果 21% O2和5% O2環(huán)境培養(yǎng)的hUCMSCs表面標(biāo)志CD73、CD90、CD105的表達(dá)均為陽性(>95%),CD34、CD45、HLA-DR的表達(dá)均為陰性(<2%),均具有成骨、成脂、成軟骨三系分化的能力;5% O2組的PDT均顯著小于21% O2組(P<0.05);PBMC經(jīng)PHA-P刺激后觀察到細(xì)胞增殖聚集,與hUCMSCs共培養(yǎng)后幾乎沒有聚集出現(xiàn),與PBMC+PHA-P組比較,PBMC+PHA-P+hUCMSCs(21%或5% O2)組子代細(xì)胞明顯減少,PBMC+PHA-P+hUCMSCs(5% O2)組PBMC抑制率為(61.44±0.92)%,與PBMC+PHA-P+hUCMSCs (21% O2)抑制率(60.48±4.00)%相當(dāng),無統(tǒng)計學(xué)差異,且兩組hUCMSCs對CD8+T細(xì)胞的抑制作用無統(tǒng)計學(xué)差異。與21% O2組比較,5% O2組hUCMSCs HIF-1α、IGF-2、SDF-1、HGF、VEGF、bFGF、NGF mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05、0.001),TGF-β無明顯變化; 5% O2組hUCMSCs培養(yǎng)上清IGF-2水平顯著高于21% O2組(P<0.001)。結(jié)論 5% O2環(huán)境可使hUCMSCs的增殖能力和相關(guān)生長因子的表達(dá)增強(qiáng),尤其是IGF-2,但依然保持著與21% O2環(huán)境培養(yǎng)的hUCMSCs相似的表型、分化能力以及淋巴細(xì)胞增殖抑制能力。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2022年第45卷第5期 >2022,45(5):886-894. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2022.05.010
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低氧培養(yǎng)環(huán)境對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及生物學(xué)特性的影響

Effects of hypoxia on proliferation and biological characteristics of human umbilical cord mesenchymal stem cells

發(fā)布日期:2022-05-10
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