max)為基礎設置加藥濃度,陰性測試藥設置濃度梯度為:1/2Cmax、Cmax、2Cmax、3Cmax、4Cmax;陽性測試藥設置濃度梯度為:1/8Cmax、1/4Cmax、1/2Cmax、Cmax、2Cmax。測試藥物在維持培養(yǎng)液(培養(yǎng)液加入1×106 U·L-1的白血病抑制因子)中作用于PA-1細胞24 h后,基于高內涵篩選技術,應用DAPI、Calcein-AM、PI共染PA-1細胞,通過共聚焦成像檢測熒光強度,計算細胞存活率;測試藥物在分化培養(yǎng)液(不加入白血病抑制因子)中作用于PA-1細胞24 h后,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術檢測多能性基因Oct4、Sox2和Nanog的表達變化。結果 DAPI、Calcein-AM、PI 3者共染可以很好地區(qū)分活細胞及死細胞;陰性測試藥維生素C、維生素E、青霉素G對PA-1細胞的增殖能力均無影響;與對照組比較,陽性測試藥5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤1/4Cmax及以上濃度引起PA-1細胞存活率顯著下降(P<0.05);環(huán)磷酰胺1/8Cmax及以上濃度引起PA-1細胞存活率顯著下降(P<0.05)。陰性測試藥維生素C、維生素E、青霉素G對PA-1細胞多能性基因Sox2、Oct4、Nanog的表達均無影響。與對照組比較,陽性測試藥5-氟尿嘧啶1/8Cmax及以上濃度使PA-1細胞多能性基因Sox2、Oct4、Nanog的表達顯著下降(P<0.05);甲氨蝶呤1/8Cmax及以上濃度使Oct4、Nanog的表達顯著增加(P<0.05),但當濃度達到2Cmax時對Sox2的表達依然沒有影響;環(huán)磷酰胺1/8Cmax及以上濃度使Sox2、Oct4、Nanog的表達均顯著增加(P<0.05)。結論 高內涵篩選技術(DAPI、Calcein-AM、PI共染)聯(lián)合多能性基因的檢測可初步建立藥物胚胎毒性快速篩查方法。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2022年第45卷第9期 >2022,45(9):1786-1794. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2022.09.012
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高內涵篩選技術聯(lián)合多能性基因Oct4、Sox2Nanog檢測建立藥物胚胎毒性快速篩查方法

Establishment of a rapid screening method for drug embryotoxicity by high content screening combined with detection of pluripotency genes Oct4, Sox2 and Nanog

發(fā)布日期:2022-09-07
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