-1)與10 μL Tim-3(0.84 mg·mL-1)混合,在37℃黑暗孵育1 h后,轉(zhuǎn)移至1×104超濾離心管中以12 000 r·min-1離心10 min ,將沉淀加入200 μL甲醇-水(90∶10)中室溫解離10 min,12 000 r·min-1離心10 min,收集濾液,進(jìn)行UPLC-MS/MS分析。通過(guò)比較受試物組和Tim-3蛋白變性組中超濾液中待測(cè)物的峰面積,計(jì)算各待測(cè)物特異結(jié)合率。結(jié)果 經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定證明,人Tim-3-His重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建正確;純化的人Tim-3重組蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)90%以上;建立的親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用篩選體系專(zhuān)屬性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可與Tim-3蛋白特異性結(jié)合。結(jié)論 成功表達(dá)了可溶性、高純度的人Tim-3重組蛋白,成功建立親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用篩選體系,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可與Tim-3蛋白特異性結(jié)合。"/>

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首頁(yè) > 過(guò)刊瀏覽>2023年第46卷第3期 >2023,46(3):545-551. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2023.03.010
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重組人Tim-3蛋白的制備及基于親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的天然配體篩選

Preparation of recombinant human Tim-3 protein and screening of natural ligands based on affinity ultrafiltration-liquid mass spectrometry

發(fā)布日期:2023-03-08
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