-1的醚提物、醇提物、水提物處理RAW264.7細胞,分別通過CellTiter-Lumi(CTL)發(fā)光法和鈣黃綠素/碘化丙啶(Calcein/PI)染色法檢測細胞活力,確定提取物的安全濃度;利用各提取物處理脂多糖(LPS)誘導的RAW264.7細胞炎癥模型,通過格里斯試劑(Griess)測定一氧化氮(NO)釋放量,通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測白細胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)分泌,篩選具有抗炎活性的提取物。利用超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜技術(shù)(UHPLC-ESI-QE-OrbitrapMS)對有抗炎活性的提取物進行物質(zhì)分析,推測抗炎活性物質(zhì)及作用機制,并利用蛋白免疫印跡法(Western blotting)進一步驗證其對硫氧還蛋白互作蛋白(TXNIP)/p-核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)/核因子-κB(NF-κB)/NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3(NLRP3)信號通路相關(guān)蛋白表達的影響。結(jié)果 醚提物、醇提物、水提物在質(zhì)量濃度低于64 μg·mL-1時均未影響細胞活力。與模型組相比,醇提物在質(zhì)量濃度大于8 μg·mL-1時顯著降低NO釋放量(P<0.05),醚提物和醇提物在質(zhì)量濃度高達64 μg·mL-1時仍未產(chǎn)生抗炎效果;醇提物顯著降低了TNF-α、IL-1β的釋放量(P<0.05)。醇提物中共分析出36種主要化學成分。經(jīng)Western blotting實驗驗證,與模型組比較,蛤蚧定喘丸醇提物對RAW264.7細胞炎癥模型內(nèi)NLRP3炎癥小體、β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TRIF)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、p-IκBα的表達均有顯著降低作用(P<0.05),而對TXNIP、Toll樣受體4(TLR4)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路蛋白的影響并不顯著。結(jié)論 蛤蚧定喘丸通過抑制TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信號通路以及iNOS、MCP-1的合成發(fā)揮抗炎功效,推測巴馬汀、麻黃堿、偽麻黃堿、小檗堿、甘草素、藥根堿、小檗紅堿為其抗炎活性成分。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2023年第46卷第9期 >2023,46(9):1908-1918. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2023.09.010
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UHPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS結(jié)合TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信號通路的蛤蚧定喘丸抗炎機制與活性成分探討

Study on anti-inflammatory mechanism and active ingredient of Gejie Dingchuan Pill based on UHPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS technology and TRIF/pIκBα/NF-κB/NLRP3 signaling pathway

發(fā)布日期:2023-09-07
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