-1的防己諾林堿對MDCK細胞活力的影響;MDCK細胞設(shè)置對照組、模型組和防己諾林堿(2.5、5.0、10.0 μmol·L-1)組,除對照組外,以感染復數(shù)(MOI)為0.1的H1N1病毒感染MDCK細胞,加入防己諾林堿共同孵育12 h,同時設(shè)置防己諾林堿(10.0 μmol·L-1)與病毒共同孵育4、8 h組,通過實時熒光定量PCR (qRT-PCR,檢測HIN1 mRNA表達)和Western blotting [H1N1病毒核蛋白(NP)]檢測防己諾林堿對病毒復制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色檢測防己諾林堿(10.0 μmol·L-1)對MDCK細胞死亡的影響;qRT-PCR法檢測防己諾林堿檢測防己諾林堿預處理、病毒感染早期藥物處理、病毒感染晚期藥物處理以及吸附和進入階段給藥對病毒復制的影響;MDCK細胞轉(zhuǎn)染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3雙熒光質(zhì)粒,觀察防己諾林堿對EGFP-LC3的熒光強度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影響,設(shè)置自噬誘導劑雷帕霉素(0.5 μmol·L-1)、自噬晚期抑制劑氯喹(10 μmol·L-1)、巴佛洛霉素A1 (100 nmol·L-1)對照。轉(zhuǎn)染過EGFP-LC3質(zhì)粒的MDCK細胞感染H1N1病毒,免疫熒光檢測防己諾林堿對LC3與胞內(nèi)的病毒NP蛋白共定位的影響;體外培養(yǎng)A549細胞,以MOI為0.1的H1N1病毒感染,Western blotting檢測防己諾林堿對LC3II/LC3I蛋白表達的影響。結(jié)果 防己諾林堿對MDCK細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為40.19 μmol·L-1 ;與模型組比較,防己諾林堿以濃度相關(guān)性的方式抑制HIN1 mRNA表達,以濃度和時間相關(guān)性的方式抑制NP蛋白表達(P<0.01、0.001);顯著減少H1N1誘導的細胞死亡(P<0.001);抑制H1N1病毒進入過程。與對照組比較,防己諾林堿處理誘導LC3熒光聚集,誘導EGFP-LC3和mCherry-LC3雙熒光共定位顯著增加(P<0.001)。與模型組比較,防己諾林堿處理明顯減少NP的熒光數(shù)量(P<0.001),同時造成LC3熒光積累并與胞內(nèi)的病毒NP蛋白共定位;引起LC3II積累(P<0.01、0.001)。結(jié)論 防己諾林堿同氯喹和巴佛洛霉素A1一致,阻斷自噬途徑,使病毒粒子在自噬體內(nèi)滯留,破壞病毒生命周期。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2024年第47卷第4期 >2024,47(4):711-719. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2024.04.005
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防己諾林堿阻斷自噬抑制 H1N1病毒感染的研究

Effect of fangchinoline against H1N1 infection by blocking autophagy

發(fā)布日期:2024-04-09
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