-1的防己諾林堿對(duì)MDCK細(xì)胞活力的影響;MDCK細(xì)胞設(shè)置對(duì)照組、模型組和防己諾林堿(2.5、5.0、10.0 μmol·L-1)組,除對(duì)照組外,以感染復(fù)數(shù)(MOI)為0.1的H1N1病毒感染MDCK細(xì)胞,加入防己諾林堿共同孵育12 h,同時(shí)設(shè)置防己諾林堿(10.0 μmol·L-1)與病毒共同孵育4、8 h組,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qRT-PCR,檢測(cè)HIN1 mRNA表達(dá))和Western blotting [H1N1病毒核蛋白(NP)]檢測(cè)防己諾林堿對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色檢測(cè)防己諾林堿(10.0 μmol·L-1)對(duì)MDCK細(xì)胞死亡的影響;qRT-PCR法檢測(cè)防己諾林堿檢測(cè)防己諾林堿預(yù)處理、病毒感染早期藥物處理、病毒感染晚期藥物處理以及吸附和進(jìn)入階段給藥對(duì)病毒復(fù)制的影響;MDCK細(xì)胞轉(zhuǎn)染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3雙熒光質(zhì)粒,觀察防己諾林堿對(duì)EGFP-LC3的熒光強(qiáng)度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影響,設(shè)置自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(0.5 μmol·L-1)、自噬晚期抑制劑氯喹(10 μmol·L-1)、巴佛洛霉素A1 (100 nmol·L-1)對(duì)照。轉(zhuǎn)染過EGFP-LC3質(zhì)粒的MDCK細(xì)胞感染H1N1病毒,免疫熒光檢測(cè)防己諾林堿對(duì)LC3與胞內(nèi)的病毒NP蛋白共定位的影響;體外培養(yǎng)A549細(xì)胞,以MOI為0.1的H1N1病毒感染,Western blotting檢測(cè)防己諾林堿對(duì)LC3II/LC3I蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果 防己諾林堿對(duì)MDCK細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為40.19 μmol·L-1 ;與模型組比較,防己諾林堿以濃度相關(guān)性的方式抑制HIN1 mRNA表達(dá),以濃度和時(shí)間相關(guān)性的方式抑制NP蛋白表達(dá)(P<0.01、0.001);顯著減少H1N1誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(P<0.001);抑制H1N1病毒進(jìn)入過程。與對(duì)照組比較,防己諾林堿處理誘導(dǎo)LC3熒光聚集,誘導(dǎo)EGFP-LC3和mCherry-LC3雙熒光共定位顯著增加(P<0.001)。與模型組比較,防己諾林堿處理明顯減少NP的熒光數(shù)量(P<0.001),同時(shí)造成LC3熒光積累并與胞內(nèi)的病毒NP蛋白共定位;引起LC3II積累(P<0.01、0.001)。結(jié)論 防己諾林堿同氯喹和巴佛洛霉素A1一致,阻斷自噬途徑,使病毒粒子在自噬體內(nèi)滯留,破壞病毒生命周期。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2024年第47卷第4期 >2024,47(4):711-719. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2024.04.005
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防己諾林堿阻斷自噬抑制 H1N1病毒感染的研究

Effect of fangchinoline against H1N1 infection by blocking autophagy

發(fā)布日期:2024-04-09
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