-1的角質(zhì)形成細胞生長因子(KGF)刺激人永生化角質(zhì)形成細胞系HaCaT建立銀屑病細胞模型,將細胞分為對照組、模型組及復(fù)方澤漆沖劑5 %、10 %、20 %含藥血清組,CCK-8法檢測不同體積分數(shù)含藥血清作用于HaCaT細胞0、24、48、72 h時的細胞活力,確定復(fù)方澤漆沖劑含藥血清最佳體積分數(shù)及作用時間。體外以10 ng·mL-1的KGF刺激HaCaT細胞建立銀屑病細胞模型,以siRNA基因沉默HaCaT細胞NLRP3,將細胞分為對照組、模型組、10 %含藥血清組、si-NLRP3-NC組(質(zhì)粒陰性對照)、si-NLRP3組,CCK-8法檢測復(fù)方澤漆沖劑含藥血清對銀屑病模型細胞相對活力的影響;ELISA檢測含藥血清干預(yù)后白細胞介素-1β(IL-1β)、IL-17α、IL-23、IL-8和趨化因子配體(CXCL)1、CXCL2的分泌水平及乳酸脫氫酶(LDH)釋放量;實時熒光定量PCR (qRT-PCR)分析NLRP3、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、凋亡相關(guān)斑點樣蛋白(ASC)、磷脂酰激醇激酶(PI3K)、絲氨酸/蘇氨酸激酶(Akt)、核因子-κB (NF-κB)的mRNA表達水平;Western blotting分析NLRP3、Caspase-1、ASC、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、cleaved-Caspase-1、Gasdermin D (GSDMD)的蛋白表達水平;免疫熒光檢測p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、ASC、Caspase-1的表達與分布。結(jié)果 10 %復(fù)方澤漆沖劑含藥血清及作用48 h為含藥血清最佳作用體積分數(shù)和時間;在KGF刺激HaCaT細胞增殖的銀屑病細胞模型中,與對照組比較,IL-17α、IL-23、IL-1β、IL-8和CXCL1、CXCL2的分泌水平升高,LDH釋放量顯著升高;與模型組相比較,10 %復(fù)方澤漆沖劑含藥血清干預(yù)48 h后,銀屑病細胞模型中IL-17α、IL-23、IL-1β、IL-8和CXCL1、CXCL2表達顯著降低,LDH釋放量顯著下降;NLRP3、ASC、Caspase-1、PI3K、Akt、NF-κB的mRNA表達水平也有所降低;含藥血清處理后,NLRP3、Caspase-1、ASC、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、cleaved-Caspase-1、GSDMD的蛋白表達水平下降明顯,p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、ASC、Caspase-1的表達與分布也有所減少。結(jié)論 復(fù)方澤漆沖劑含藥血清通過下調(diào)PI3K/Akt/NF-κB信號通路及NLRP3炎癥小體發(fā)揮對銀屑病細胞模型的干預(yù)作用。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2024年第47卷第5期 >2024,47(5):1051-1062. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2024.05.015
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復(fù)方澤漆沖劑含藥血清調(diào)控PI3K/Akt/NF-κB通路與NLRP3炎癥小體緩解銀屑病細胞模型損傷作用機制研究

Mechanism of action of Compound Zeqi Punch-containing serum on psoriasis cell model by regulating PI3K/Akt/NF-κB pathway and NLRP3 inflammasome

發(fā)布日期:2024-05-11
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