-1)組或對照組、蔓性千斤拔素A 30 μmol·L-1、SCH772984 10 μmol·L-1+蔓性千斤拔素A 30 μmol·L-1和SCH772984 10 μmol·L-1濃度組,對照組細胞培養(yǎng)液為含1%胎牛血清的RMPI 1640培養(yǎng)基,其余各組分別加入蔓性千斤拔素A或SCH772984(預處理細胞1 h)使達到相應濃度,連續(xù)培養(yǎng)12 h。MTT法檢測細胞活力;細胞集落形成實驗檢測細胞集落形成的情況;細胞自噬染色檢測試劑盒檢測細胞內自噬的情況;免疫熒光檢測細胞內LC3B蛋白表達水平的變化;Western blotting實驗檢測細胞內磷酸化的細胞外調節(jié)蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化的哺乳動物雷帕霉素靶標(p-mTOR)、自噬相關蛋白Beclin 1(Beclin 1)、螯合體1(P62)蛋白表達水平的變化。結果 與對照組比較,MTT法檢測結果顯示各濃度(20、25、30 μmol·L-1)蔓性千斤拔素A能夠顯著抑制A549細胞活力(P<0.05、0.001),SCH772948 (10 μmol·L-1)能夠顯著逆轉蔓性千斤拔素A誘導的A549細胞死亡(P<0.01);細胞集落形成實驗顯示20、25、30 μmol·L-1蔓性千斤拔素A能顯著抑制A549細胞集落的形成(P<0.001);細胞自噬染色檢測試劑盒結果顯示20、25、30 μmol·L-1蔓性千斤拔素A能顯著抑制A549細胞自噬,SCH772948 10 μmol·L-1能夠顯著逆轉蔓性千斤拔素A介導的A549細胞自噬抑制;免疫熒光結果顯示蔓性千斤拔素A 30 μmol·L-1能夠顯著減弱LC3B的熒光,SCH772948 10 μmol·L-1能夠顯著逆轉蔓性千斤拔素A導致的LC3B熒光減弱;Western blotting實驗結果表明,20、25、30 μmol·L-1蔓性千斤拔素A能夠使A549細胞內p-ERK、p-mTOR、P62蛋白表達水平顯著升高及Beclin 1蛋白表達水平顯著降低(P<0.001),SCH772948 10 μmol·L-1能夠顯著逆轉蔓性千斤拔素A導致的A549細胞內p-ERK、p-mTOR、P62蛋白表達水平升高及Beclin 1蛋白降低(P<0.001)。結論 蔓性千斤拔素A可通過ERK/mTOR通路抑制非小細胞肺癌細胞自噬并導致細胞死亡。"/>

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首頁 > 過刊瀏覽>2024年第47卷第9期 >2024,47(9):2090-2098. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2024.09.017
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基于ERK/mTOR通路探討蔓性千斤拔素A對非小細胞肺癌細胞自噬的影響

Effect of flemiphilippinin A on autophagy in non-small cell lung cancer cells based on ERK/mTOR pathway

發(fā)布日期:2024-09-09
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