摘要:
目的 探討白芍總苷對1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致帕金森病小鼠的保護(hù)機(jī)制。方法 采用60%乙醇熱回流法提取白芍總苷,高效液相色譜法測定白芍總苷化學(xué)成分。60只小鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、美多芭(100 mg/kg)組和白芍總苷(total glucosides of paeony,TGP)低、中、高劑量(0.75、1.50、3.00 g/kg)組,各給藥組ig給藥(20 mL/kg),對照組、模型組ig等體積雙蒸水(double-distilled water,ddH₂O),1次/d,連續(xù)15 d,自第8天起,對照組ip生理鹽水,其他各組小鼠每天ip MPTP(30 mg/kg)。第15天ip MPTP 1 h后,檢測小鼠的自主活動、滾軸能力及懸掛能力;免疫組織化學(xué)法檢測各組小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的損傷情況,同時檢測腦組織中單胺氧化酶-B(monoamine oxidase-B,MAO-B)活性水平、神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(dopamine,DA)及其代謝產(chǎn)物3,4-二羥基苯乙酸(3,4-Dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC)、高香草酸(homovanillic acid,HVA);蛋白免疫印跡法檢測多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(dopamine Transporter,DAT)、酪氨酸羥化酶(tyrosine Hydroxylase,TH)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、磷酸化環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(phosphorylated cAMP-response element-binding protein,p-CREB)、環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated X Protein,Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 MPTP誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型自發(fā)站立次數(shù)顯著減少、懸掛能力和滾軸能力顯著降低,顯著降低黑質(zhì)致密部TH陽性神經(jīng)元數(shù)量;經(jīng)高劑量白芍總苷處理后能顯著增加小鼠的自發(fā)站立次數(shù),提高滾軸能力(P<0.05);顯著增加TH陽性神經(jīng)元數(shù)量(P<0.01),提高小鼠腦內(nèi)的DA、HVA含量和DAT、TH、BDNF蛋白表達(dá)水平及p-CREB/CREB、Bcl-2/Bax的值(P<0.01),抑制小鼠腦內(nèi)MAO-B、DOPAC、cleaved Caspase-3的表達(dá)(P<0.01)。結(jié)論 白芍總苷高劑量組對MPTP誘導(dǎo)的小鼠損傷帕金森模型具有顯著的保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與白芍總苷能夠抑制MAO-B活性,提高DA及DAT、TH蛋白表達(dá)和激活CREB/BDNF及Bc1-2/Bax通路有關(guān)。