摘要:
目的 研究茵陳活性成分濱蒿內(nèi)酯在BeWo細(xì)胞模型上的跨胎盤攝取轉(zhuǎn)運特性。方法 建立濱蒿內(nèi)酯及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)雙氯芬酸鈉在細(xì)胞裂解液、Hank's平衡鹽溶液(HBSS)中的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)分析方法,并進(jìn)行了方法學(xué)驗證;MTT法考察濱蒿內(nèi)酯(1、5、20、50、100、200、400、800、1 000 μ mol/L )作用4 h對BeWo細(xì)胞活性的影響;應(yīng)用建立的UPLC-MS/MS法考察給藥時間、藥物濃度、溫度、pH值、轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑對BeWo細(xì)胞攝取濱蒿內(nèi)酯的影響;以BeWo單層細(xì)胞為體外模型,應(yīng)用Transwell孔板,考察給藥時間、藥物濃度、轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑對濱蒿內(nèi)酯的跨胎盤轉(zhuǎn)運的影響。結(jié)果 建立的UPLC-MS/MS分析方法專屬性強(qiáng),靈敏度高,重現(xiàn)性好,提取回收率、基質(zhì)效應(yīng)和樣品穩(wěn)定性等均符合生物樣品藥物含量的分析測定要求。濱蒿內(nèi)酯在濃度為1~800 μmol/L時對BeWo細(xì)胞無明顯毒性作用。濱蒿內(nèi)酯在BeWo細(xì)胞上的攝取隨時間和濃度變化呈線性增加,在所選取的濃度范圍內(nèi)無飽和趨勢,不符合米氏方程;濱蒿內(nèi)酯在BeWo細(xì)胞上的攝取量在4℃和37℃條件無顯著性差異,表明攝取轉(zhuǎn)運過程不受溫度的影響;與生理條件下(pH 7.4)比較,在酸性條件下(pH 5.0或6.5),攝取量略有降低,無顯著性差異;堿性條件下(pH 8.6),攝取量顯著減少(P<0.001);濱蒿內(nèi)酯在細(xì)胞膜刷狀緣側(cè)的攝取不受各類膜轉(zhuǎn)運蛋白底物或抑制劑的影響。濱蒿內(nèi)酯在BeWo細(xì)胞上的2個方向的轉(zhuǎn)運速率無顯著差異;二者表觀滲透系數(shù)(Papp)值極為接近,藥物外排率(Pratio)約為1;在考察的濃度范圍(5、50、100、200、400 μmol/L)內(nèi),濱蒿內(nèi)酯在母-胎和胎-母2個方向上轉(zhuǎn)運均呈線性增加,且無飽和趨勢;濱蒿內(nèi)酯在BeWo單層細(xì)胞的轉(zhuǎn)運不受各類膜轉(zhuǎn)運蛋白底物或抑制劑的影響。結(jié)論 濱蒿內(nèi)酯在BeWo細(xì)胞上的攝取及跨膜轉(zhuǎn)運機(jī)制為非載體蛋白介導(dǎo)的被動轉(zhuǎn)運。