摘要:
目的 基于生物信息分析與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)與機(jī)體血小板穩(wěn)態(tài)的關(guān)系。方法 運(yùn)用DisGeNET、GeneCards、STRING 11.5等數(shù)據(jù)庫(kù),分析hUCMSCs誘發(fā)血小板減少的靶點(diǎn)及通路。將SD大鼠隨機(jī)區(qū)組分為5組:陰性對(duì)照組(0.9%氯化鈉注射液)、溶媒對(duì)照(80mg·kg-1白蛋白)組和hUCMSCs高、中、低劑量(1.0×107、5×106、2.5×106個(gè)·kg-1,分別為臨床等效劑量的10.0、5.0、2.5倍)組,每組6只,雌雄各半。每周按10mL·kg-1尾iv1次,共4次,與臨床擬用方法一致。全自動(dòng)血液分析儀分析血小板相關(guān)的指標(biāo):血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血小板壓積(PCT)、血小板分布寬度(PDW)、平均血小板體積(MPV);剖取大鼠胸骨,取骨髓,制備骨髓涂片,瑞特-吉姆薩復(fù)合染液染色,光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)全片巨核細(xì)胞總數(shù)、產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞數(shù);測(cè)量脾臟總長(zhǎng)度;蘇木精-伊紅(HE)和過碘酸-雪夫(PAS)染色脾臟作組織病理學(xué)檢查;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)分析肝臟促血小板生成素(TPO)、血小板生成素受體(Mpl)、Krüppel樣因子1(Klf1)、Friend白血病整合素1(FLI1)、GATA結(jié)合蛋白1(GATA1)mRNA變化。結(jié)果 hUCMSCs與血小板減少相關(guān)的靶點(diǎn)有209個(gè),作用于158條信號(hào)通路,與血小板生成最密切的通路為造血細(xì)胞譜通路,包含了20個(gè)靶點(diǎn)。以平均連接度篩選出14個(gè)核心靶點(diǎn):IL6、TNFRSF11A、CD34、KIT、IL4、CSF2、CSF3、IL3、IL2RA、TPO、EPO、TFRC、CD44、IL11。CD44既是核心靶點(diǎn)又是hUCMSCs陽(yáng)性表面標(biāo)志物。與陰性對(duì)照、溶媒對(duì)照組比較,hUCMSCs高、中、低劑量組PLT、PCT顯著降低(P<0.05),PDW、MPV差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;hUCMSCs組全片巨核細(xì)胞總數(shù)、產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;hUCMSCs高、中劑量組脾臟長(zhǎng)度顯著增加(P<0.05);PAS染色見hUCMSCs高、中劑量組脾臟血小板儲(chǔ)存增加;hUCMSCs高、中、低劑量組肝臟組織TPO、Mpl、KLF1 mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.05),FLI1、GATA1 mRNA表達(dá)變化不顯著。結(jié)論 CD44+hUCMSCs可能通過促脾臟吞噬血小板,增加血小板在脾臟中儲(chǔ)存,使血液中PLT、PCT減少,從而擾亂血小板穩(wěn)態(tài)。