摘要:
目的 采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)黃瑞香發(fā)揮抗胃癌作用的潛在機(jī)制,并通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步驗(yàn)證。方法 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(TCMSP)篩選黃瑞香的有效成分,通過(guò)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)和PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)篩選獲得黃瑞香活性成分的相關(guān)靶點(diǎn)。通過(guò)GeneCards及DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)檢索獲得胃癌疾病相關(guān)靶點(diǎn)。利用Cytoscape軟件構(gòu)建黃瑞香活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò);通過(guò)STRING、Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)成分和胃癌疾病交集靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)和基因本體(GO)注釋及京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)通路富集分析。采用MTT實(shí)驗(yàn)考察黃瑞香異戊烯基黃酮成分構(gòu)樹(shù)黃酮醇F(broussoflavonol F)、daphnegiravone D、daphgiflavone C體外對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)這3種異戊烯基黃酮類化合物作用48h后胃癌MGC803細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)基因的表達(dá)。結(jié)果 篩選得到黃瑞香70個(gè)活性成分,黃瑞香作用于胃癌的42個(gè)相關(guān)靶點(diǎn),其中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、鼠肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)、Ⅰ類磷脂酰肌醇-3激酶催化亞基α(PIK3CA)、酪氨酸激酶(MET)以及絲裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)等為核心靶點(diǎn)。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)黃瑞香作用于胃癌主要富集在癌癥、PI3K/Akt以及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)等通路中?;钚詼y(cè)試結(jié)果發(fā)現(xiàn),異戊烯基黃酮成分構(gòu)樹(shù)黃酮醇F、daphnegiravone D、daphgiflavone C對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)具有較好的抑制作用。同時(shí),與對(duì)照組比較,構(gòu)樹(shù)黃酮醇F、daphnegiravone D、daphgiflavone C可顯著抑制胃癌MGC803細(xì)胞EGFR、PI3K和Akt基因的表達(dá)(P<0.05、0.01、0.001)。結(jié)論 黃瑞香可能以異戊烯基黃酮為主要的抗胃癌活性成分,以EGFR、BRAF、PIKC3A、MET等蛋白為核心作用靶點(diǎn),主要經(jīng)I3K/Akt以及MAPK等相關(guān)信號(hào)通路發(fā)揮治療胃癌的作用。