摘要:
目的 基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)藥理學、分子對接、分子動力學模擬和實驗驗證,探究人參固本丸的物質(zhì)基礎(chǔ)及延緩皮膚衰老的作用機制。方法 根據(jù)正、負離子模式下質(zhì)譜信息、質(zhì)荷比、二級碎片離子等信息結(jié)合相關(guān)文獻,推測鑒定化學成分。采用網(wǎng)絡(luò)藥理學方法,通過Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫獲取人參固本丸的作用靶點,Genecards數(shù)據(jù)庫篩選皮膚衰老靶點,取交集靶點,利用蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)和京都基因與基因組百科全書(KEGG)分析核心靶點的關(guān)鍵通路。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學結(jié)果,選擇P值排名第1的HIF-1信號通路及其對應(yīng)的人參固本丸中化合物進行分子對接及分子動力學模擬。應(yīng)用H2O2誘導的HaCaT細胞皮膚衰老模型,CCK-8法評價人參固本丸(25、50、100、200、400、600 μg·mL-1)及其含藥血清(1%、5%、10%、20%、40%)對HaCaT細胞存活率的影響;給予人參固本丸(50、100、200 μg·mL-1)后,DCFH-DA避光染色檢測活性氧(ROS)含量,檢測細胞劃痕愈合率,實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測衰老相關(guān)基因、炎性衰老相關(guān)分泌表型基因、HIF-1信號通路中核心靶點的mRNA水平。結(jié)果 從人參固本丸中鑒定出95個化合物;網(wǎng)絡(luò)藥理學分析出12個核心靶點,篩選出HIF-1信號通路及對應(yīng)的核心靶點蛋白激酶B(AKT1)、絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK3)、信號傳導及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3(STAT3)、表皮生長因子受體(EGFR)、B淋巴細胞瘤-2(BCL2)、白細胞介素(IL)-6、低氧誘導因子1A(HIF1A)。分子對接和分子動力學模擬驗證活性成分5, 7-二羥基-6, 8, 4'-三甲氧基黃酮、(+)-松脂醇、亞油酸、偽原薯蕷皂苷、N-對香豆酰酪胺和HIF-1信號通路核心靶點親和力良好,構(gòu)象穩(wěn)定。體外實驗表明,與模型組比較,人參固本丸可促進HaCaT細胞增殖、提高愈合率、降低ROS水平(P<0.05、0.01),人參固本丸組MAPK3、STAT3、IL-6、HIF1A、AKT1、腫瘤壞死因子(TNF)-α、p53、p21、p16 mRNA水平表達顯著降低(P<0.05、0.01),表皮生長因子受體(EGFR)、B淋巴細胞瘤-2(BCL2)mRNA水平表達升高(P<0.05、0.01)。結(jié)論 人參固本丸中的化學成分可能通過調(diào)控AKT1、MAPK3、STAT3、EGFR、BCL2、IL-6、HIF1A靶點,降低ROS、炎癥水平,延緩皮膚衰老。